发布日期:2025-04-13 18:20 点击次数:174
生物通报说念:在2006年12月12日的《好意思国科学院院刊》(PNAS)杂志的相聚版上公示来自好意思国纽约哥伦比亚大学策划东说念主员发表的一篇诈欺可领会荧光核苷可逆terminator(cleavable fluorescent nucleotide reversible terminators)进行四色DNA合成测序(SBS国产视频, sequencing by synthesis)的策划申报。这篇著述的第一作家是哥伦比亚大学的华侨学者车靖岳(Jingyue Ju)。
该篇著述的检索信息如下:
Published online before print December 12, 2006Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 10.1073/pnas.0604627103
ChemistryApplied Biological SciencesFour-color DNA sequencing by synthesis using cleavable fluorescent nucleotide reversible terminators
Jingyue Ju * , Dae Hyun Kim * , Lanrong Bi * , Qinglin Meng * ¶, Xiaopeng Bai * ¶, Zengmin Li * , Xiaoxu Li * , Mong Sano Marma * , Shundi Shi *, Jian Wu * ¶, John R. Edwards * , Aireen Romu *, and Nicholas J. Turro ¶
*Columbia Genome Center, Columbia University College of Physicians and Surgeons, New York, NY 10032; and Departments of Chemical Engineering, ¶Chemistry, and Biomedical Engineering, Columbia University, New York, NY 10027
多聚酶反馈经由中在一种固体名义上进行的DNA 合成测序(SBS)是态状DNA序列的一种经典圭臬。在这篇著述中,策划东说念主员报说念说,他们诈欺分子工程圭臬构建出了这么的一种DNA测序系统。
在这种圭臬中,策划东说念主员通过将一种可裂解荧光基谐和合到碱基上并诈欺一种小的化学可逆部分指导3’-OH基团以使它们简略被DNA团员酶识别为反馈底物,从而将四种核苷(A,C,G,T)修饰成一种可逆的terminators。策划东说念主员发现一种烯丙基moiety简略见效地动作联结荧光基团和3’-O-烯丙基修饰核苷的联结剂,从而酿成化学上可裂解的荧光核苷可逆terminator——3’-O-烯丙基荧光基团以用于SBS。
荧光基团和一个DNA繁衍居品上的3’-O-烯丙基(通过在一种团员酶反馈中整合3’-O-烯丙基-dNTPs-烯丙基荧光基团产生)在30秒中简略被缓冲液中Pd(钯)催化的烯丙基化作用同期移除。
这种一步完成的双重脱烯丙基反馈因此简略为止团员酶反馈丙加多SBS的后果。通过使用这种类型的荧光核苷近似物,从而得以在一种DNA芯片和一种四色荧光扫描仪上精准地测序含有均聚物区域的DNA模板。(生物通杨遥)
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